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新聞動態(tài) / news
人結腸癌細胞株進行液氮儲存要注意些什么?
原載自:tajnning.com[行情動態(tài)] 2025-11-19 瀏覽次數(shù):27
細胞株預處理環(huán)節(jié)不容小覷。首先得確保所培養(yǎng)的細胞處于對數(shù)生長期,此時細胞活力旺盛、狀態(tài)穩(wěn)定,適合進行后續(xù)操作。收集細胞時,要采用溫和的胰酶消化法,嚴格控制消化時間與溫度,避免過度消化損傷細胞結構;接著用含血清的培養(yǎng)基終止反應,輕柔吹打制成單細胞懸液,隨后離心沉淀細胞,棄去上清液,為防凍保護劑的加入做好準備。
精心挑選適配的防凍保護劑。常用的DMSO能有效降低冰點、減少冰晶形成,保護細胞免受低溫損害。一般配置濃度在5%-10%,過高可能產(chǎn)生毒性,過低則起不到防護作用。將適量DMSO緩慢加入細胞沉淀,輕輕混勻,讓細胞充分浸潤其中,這一步動作要輕緩,防止細胞因劇烈沖擊受損。
規(guī)范的分裝流程至關重要。把處理好的細胞懸液按需求分裝到無菌凍存管中,每管容量不宜過多,通常1-2毫升為宜,預留一定空間防止液體膨脹破裂凍存管。密封好后,做好清晰標記,注明細胞名稱、代次、日期等關鍵信息,方便日后查找取用。
循序漸進的降溫過程是核心步驟。直接投入液氮會使細胞瞬間遭受巨大溫差而死亡,需借助程序降溫儀,以每分鐘1℃-3℃的速率緩慢降溫至-80℃左右,再放入液氮罐長期儲存;若沒有專業(yè)儀器,也可將凍存管置于厚壁泡沫盒等隔熱材料中,層層包裹棉花,放置在-80℃冰箱過夜后再轉(zhuǎn)移至液氮環(huán)境。
日常管理也不容忽視。定期檢查液氮罐內(nèi)液位高度,及時補充液氮,保證細胞始終浸沒在液氮之下;拿取細胞時戴好防護手套,防止凍傷,嚴格遵循無菌操作原則,避免交叉污染,如此才能確保人結腸癌細胞株在液氮“呵護”下長久維持活性,為科研持續(xù)助力。
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